1. Analise as afirmativas abaixo e responda: 

I) No sistema óptico, os elementos responsáveis pela detecção dos sinais luminosos são os detectores. Os detectores podem ser fotomultiplicadores ou fotodiodos em avalanche. Cada detector é responsável por reconhecer um comprimento de onda específico.

II) No citômetro de fluxo, o sistema fluídico é responsável por introduzir a amostra no sistema e transportá-la em um fluxo contínuo, de forma que as partículas ou células sejam alinhadas e interceptadas individualmente pelo laser. O compartimento onde esse processo ocorre é a câmara de fluxo.

III) O sistema eletrônico é o responsável pela conversão dos sinais luminosos em eletrônicos, e posteriormente em digitais. Desta forma, a informação pode ser visualizada no software do computador.  

IV) A Citometria de Fluxo possibilita uma análise multiparamétrica das células ou partículas de interesse apenas a partir das medidas de dispersão frontal (FSC) e lateral (SSC) da luz incidente.

V) As ''cores do citômetro" correspondem à quantidade de fluorescências que ele é capaz de detectar, enquanto os "parâmetros do citômetro" correspondem à quantidade e fluorescências mais FSC e SSC. Desta forma, um citômetro que detecta 13 fluorescências, é um citômetro de 13 cores e 15 parâmetros. 

2. Os anticorpos monoclonais possuem algumas características específicas e entre elas podemos classificá-los em monoclonais e policlonais. Uma característica para serem classificados como monoclonal é: 

3. Os fluorocromos são compostos fluorescentes que absorvem energia luminosa em um determinado comprimento de onda e emitem luz em um comprimento de onda maior. Em um espectro visível cada fluorocromo possui comprimentos de onda distintos. Entre eles, podemos dizer que: 

4. O que é compensação em citometria de fluxo e por que é necessária?  

5. Qual é a principal função do ajuste de voltagem em um Citômetro de Fluxo?

6. Avalie as afirmativas a seguir sobre o Controle de Qualidade em Citometria de Fluxo no Laboratório Clínico. 
 
A) A Fase pré-analítica envolve desde a solicitação do exame até a chegada da amostra no laboratório. No que diz respeito ao anticoagulante utilizado para coleta e transporte de amostra de medula óssea para estudo imunofenotípico, recomenda-se o uso de EDTA ou heparina. No caso do Líquido cefalorraquidiano (Líquor) recomenda-se o uso de Transfix e os líquidos cavitários devem ser colocados em tubo seco.  
 
B) O citômetro de fluxo deve ser diariamente monitorado e essa ação deve ser registrada e documentada. A verificação do sistema fluídico, vácuo, pressão, alinhamento do laser e detecção da dispersão de luz e das fluorescências deve ser realizada antes do início da rotina. 
 
C) A Compensação de cores dos painéis utilizados deve ser diariamente verificada e documentada. Essa verificação pode ser realizada utilizando a primeira amostra do dia para o painel específico. Não é recomendado o ajuste diário, mas sim, a verificação se está compatível com os limites de aceitabilidade estabelecidos. 
 
D) O controle de qualidade interno visa garantir que os resultados obtidos sejam precisos, consistentes e reprodutíveis. Esse desempenho é verificado, geralmente, por reagentes comerciais com valores de referência que avaliam o processo técnico como um todo. 
 
E) Já o controle de qualidade externo avalia o controle técnico do processo por meio de programas externos de proficiência e controles comerciais externos. 

7. Durante a rotina laboratorial no setor da citometria de fluxo, algumas etapas são essenciais para um diagnóstico assertivo e preciso para o paciente. Quais são as etapas mais importantes a serem seguidas? 

8. Assinale a alternativa correta que corresponde à finalidade dos painéis imunofenotípicos padronizados e utilizados na rotina laboratorial: 

9. Assinale abaixo a sequência mais adequada e completa para avaliação de uma amostra de sangue periférico para avaliação de linfócitos: 

10. O laboratório de imunologia está realizando a quantificação de subpopulações linfocitárias utilizando citometria de fluxo. Duas abordagens diferentes são consideradas: plataforma única e plataforma dupla.

Qual das seguintes afirmações descreve corretamente uma diferença entre a plataforma única e a plataforma dupla na Citometria de Fluxo?

11. O vírus da imunodeficiência humana (HIV) apresenta em exemplo assustador das consequências da infecção e destruição de células imunes por um microrganismo. A molécula de superfície CD4 age como o receptor para o HIV. A infecção primária pode passar despercebida, e o vírus pode replicar-se no hospedeiro por vários anos antes que os sintomas da imunodeficiência possam ser vistos. Durante esse período de latência clínica, o nível de vírus no sangue e o número de células CD4 circulantes permanecem razoavelmente estáveis, mas de fato tanto as partículas virais como as células CD4 estão sendo rapidamente destruídas e substituídas, à medida que ciclos de replicação virais ocorrem em células recém-infectadas. Quando a taxa de destruição das células CD4 excede a capacidade de reposição do hospedeiro, seu número decresce a um ponto em que a imunidade celular falha deixando o hospedeiro suscetível a infecções oportunistas fatais.  
 
Selecione o gráfico de CD4 versus CD8 mais compatível com esses pacientes. 

12. Qual protocolo padronizado é utilizado para garantir a precisão e reprodutibilidade na quantificação de células CD34+ por citometria de fluxo?  

13. Quais são as principais diferenças entre a plataforma dupla e a plataforma única com beads de quantificação na citometria de fluxo?

14. Avalie as afirmações a seguir sobre a pesquisa de Hemoglobinúria Paroxística Noturna (HPN) por citometria de fluxo: 

I)   A perda de expressão de antígenos ligados à GPI somente nas hemácias não é suficiente para a confirmação diagnóstica de HPN. 
 
II)  Para se considerar uma linhagem celular com imunofenótipo característico de HPN, ela deve apresentar perda parcial ou total dos 2 antígenos ligados à GPI presentes no painel de leucócitos estudado. 
 
III)  O diagnóstico de HPN deve ser realizado em amostras de aspirado de medula óssea. 
 
IV)  Os antígenos CD235a, CD15 e CD64 são utilizados para identificação das populações de hemácias, neutrófilos e monócitos, respectivamente.

15. Sobre a liberação de resultados na pesquisa de Hemoglobinúria Paroxística Noturna (HPN) por Citometria de Fluxo, assinale a alternativa incorreta: 

16. É fundamental conhecer a maturação celular normal para realizar uma avaliação precisa das curvas de maturação durante as análises de imunofenotipagem. No processo de maturação granulocítica, podemos utilizar os seguintes marcadores, EXCETO: 

17. Os linfócitos B são capazes de produzir anticorpos contra agentes estranhos no organismo e desempenham um papel fundamental na memória imunológica. As características dos linfócitos B na citometria de fluxo incluem: 

18. Professor, 47 anos, apresentou-se à consulta médica se queixando de fadiga persistente, sensação de inchaço abdominal e infecções recorrentes nos últimos seis meses. Sem histórico médico significativo ou histórico familiar conhecido de doenças hematológicas, relatou que a fadiga intensa persistia mesmo após atividades leves e não melhorava com repouso adequado. No exame físico, não foram palpados linfonodos aumentados, mas houve uma esplenomegalia significativa e hepatomegalia leve, enquanto a pele e os sistemas cardiovascular e respiratório apresentaram-se normais. Os exames laboratoriais revelaram um hemograma completo com hemoglobina de 11,0 g/dL (indicando anemia leve), leucócitos de 3.500/mm³ (leucopenia) e plaquetas de 100.000/mm³ (trombocitopenia). A bioquímica sanguínea mostrou níveis elevados de LDH e fosfatase alcalina. O mielograma indicou hipercelularidade da medula óssea com presença de células linfoides com projeções citoplasmáticas características, conhecidas como "células pilosas". A biópsia de medula óssea confirmou a infiltração difusa da medula por linfócitos B com projeções citoplasmáticas. Com base nos sintomas, achados físicos e resultados dos exames laboratoriais, o diagnóstico foi de Tricoleucemia (Leucemia de Células Pilosas).  
 
Qual dos seguintes dot plots é mais característico de Tricoleucemia?

19. Para a realização dos exames nas leucemias agudas, é fundamental o cuidado no preparo das amostras, assim como na aquisição e análise dos dados, a fim de garantir a correta identificação e classificação das linhagens e o diagnóstico. As características dos testes de imunofenotipagem para leucemias agudas incluem: 

20. São marcadores específicos de linhagem exceto: